Margot Robbie regresa como Harley Quinn junto a Mary Elizabeth Winstead como Cazadora; Jurnee Smollett-Bell como Black Canary; Rosie Pérez como Renee Montoya; Chris Messina como Victor Zsasz; y Ewan McGregor como Roman Sionis. La recién llegada Ella Jay Basco también interpreta a Cassandra "Cass" Cain en su debut cinematográfico.